科研相关服务

CoIP-MS分析服务

 

 

    服 务 简 介

      

       免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。如果一种目标蛋白是某一蛋白复合物的一部分,利用目标蛋白的特异性抗体,就可以对整个蛋白复合物进行富集。由于过程中采用了非变性条件,保留了互作及复合体的细胞内状态。相对于酵母双杂交、pull down等方法,CoIP捕获的蛋白互作发生在所研究的特定组织细胞内,保存了互作蛋白及复合体的天然状态。

       CoIP-MS免疫共沉淀与质谱技术联用,可以用质谱鉴定这个蛋白复合物中的其他成员,高效筛选鉴定未知互作蛋白。运用LC-MS/MS技术对CoIP所捕获的蛋白产物进行鉴定分析,LC-MS/MS方法具有更高的灵敏度和几乎100%的可靠性,是主流文献中最常用的方法。

 

  • 免疫共沉淀及质谱一体化操作,一站式解决免疫沉淀及后续实验中的问题。
  • 戴安生物提供世界一流品质的标签抗体,及对应的亲和免疫凝胶/磁珠,种类齐全,使用方便。
  • 戴安生物技术人员有多年IP/CoIP操作经验,高效专业快速。
  • 高质量LC-MS/MS设备,提供极为可信的质谱结果。
  • 提供完美分析结果。

 

    服 务 内 容 

服务步骤

具体内容

周期

交付内容

报价

质粒转染(可选)

  • 客户提供表达质粒,戴安生物转染哺乳动物细胞
  • 按照客户要求,戴安生物合成表达质粒,大提质粒,转染一个6孔板哺乳动物细胞

1-4

细胞Lysate

           

立即 询价

027-65522449

 027-59325199

 

样品制备

  • 客户提供细胞裂解液
  • 戴安生物制备细胞裂解液

0.5

SDS-PAGE

抗体或填料选择

  • 客户提供一抗
  • 戴安生物提供ProA/G凝胶/磁珠
  • 戴安生物提供Anti-FLAG,HA,MYC,GFP,mCherry等标签抗体偶联的凝胶/磁珠

0

 

免疫共沉淀(CoIP)操作

  • 选择合适的抗体浓度与样本中的抗原结合,获得抗原-抗体复合物
  • 通常设置IgG对照组及IP组同步进行操作
  • PAGE或Western Blot验证IP结果

1

SDS-PAGE 或者WB图片

质谱(MS)上机处理

  • 蛋白质还原烷基化和酶解
  • C18柱除盐并溶解
  • LC-MS/MS仪器分析。

2-3

质谱结果

数据检索,蛋白鉴定

  • 软件检索,得到每个样品鉴定到的肽段和蛋白结果。
  • 对比IgG及CoIP组差异。

1

项目报告

注意事项:

  • 高品质抗体   如果抗体由客户提供,客户必须保证抗体是IP级别的,可用于IP\CoIP实验。
  • 充足的样本量:足够的蛋白量是免疫共沉淀的关键因素之一。一般正常蛋白量约 5-10 mg/ml, 浓度越高越好,总量用大于5ml.
  • 送样要求   离体后迅速超低温处理并-80℃冻存的组织样品,干冰运输; 组织:动物组织不少于400 mg;植物组织不少于2 g;细胞:2x107个细胞,可寄送活细胞,或收细胞后去培养基干冰运输。

 

    案 例 展 示 

                           

                            Anti-FLAG亲和凝胶对FLAG标签融合蛋白的富集效果                                                        Anti-HA亲和凝胶对HA标签融合蛋白的富集效果                                    

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