武汉戴安生物技术有限公司

Q7007  3xFLAG标签 多肽
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3xFLAG标签(DYKDDDDK)多肽

Cat#: Q7007

(本品仅用于科学研究,不可用于诊断及治疗)

1. 背景信息

Flag-Tag(DYKDDDDK)常用于真核蛋白质重组表达标记。3xFLAG标签多肽, 可用于洗脱与Anti-Flag亲和纯化凝胶/磁珠(IP0064S/MIP0064S)结合的融合蛋白,具有高特异性,高亲和力,中性竞争洗脱等优势。

2. 保存方法: 多肽干粉在4℃密封保存,溶解后,可于-20℃可保存1年。

3. 溶解方法:

该多肽为轻质粉末,开盖前应离心。多肽本身为酸性,建议将100ul 10xPBS溶液加至5mg多肽粉末中,彻底溶解后,加入900ul双蒸水,制成5mg/ml储存液,-20℃保存。使用时用1xPBS稀释至需要的浓度。按需求浓度稀释至工作浓度。

10xPBS配方(1,5M PBS, pH7.5): Na2HPO4x12H2O 35.8g, NaH2PO4x2H2O 2.8g, NaCl 89g, 溶于1L dd H2O,加入2‰ Azide(使用时须用双蒸水稀释10倍)

4. 使用方法举例

3xFlag peptide洗脱液竞争洗脱

4.1 1xPBS配制3×Flag peptide洗脱液, 终浓度为200μg/ml,也可根据具体情况自行调整工作浓度(一般说来,浓度越高,竞争洗脱能力越强)。

4.2 加入2ml 3×Flag peptide洗脱液(或2倍凝胶体积),轻柔混匀,浸泡0.5小时后,收集洗脱液,每次收集1ml。如有必要,再次加入2ml 3×Flag peptide洗脱液(或2倍凝胶体积),重复洗脱一次。

4.3 合并洗脱液。

4.4 SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度及浓度,并按照需求处理和保存蛋白质。

5. 竞争洗脱优势

3×Flag peptide洗脱液与蛋白质上的Flag标签竞争亲和纯化柱上的抗体,使蛋白质与抗体的结合被取代而脱离纯化柱,从而被洗脱下来。这种洗脱的特点有:

5.1 洗脱条件温和,一般不会造成蛋白质变性;有利于亲和纯化柱的保存和反复使用。

5.2 由于亲和吸附达到平衡比较慢,所以往往需要较常的时间和较大的洗脱体积。

5.3 特异性强,可以进一步消除非特异性吸附的影响,从而得到较高的分辨率。基本上不会有anti-Flag的抗体被洗脱下来。



          图标2.jpg3xFLAG标签(DYKDDDDK)多肽说明书

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